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烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEV Protease)


    产品简介

            TEV Protease (烟草蚀纹病毒蛋白酶;Tobacco etch virus protease) 是来源于烟草蚀纹病毒(TEV) Nla的重组蛋白酶,此蛋白酶被用来切除纯化后融合蛋白的亲和标签。TEV Protease具有很强的位点特异性,能够识别EXXYXQ(G/S)的七氨基酸序列(Glu-Asn-Leu- Tyr-Phe- Gln-Gly),最普通的是ENLYFQG,其切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸或丝氨酸之间。该酶在PH 5.5-8.5和4-30℃的广泛范围内皆有活性,使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而修改。通用生物系统(安徽)有限公司所产TEV Protease自E.coli表达经亲和纯化的重组蛋白酶。TEV Protease带有多聚组氨酸标签,酶切反应完毕后可通过亲和层析去除。

    操作方法

    1、在EP管中配置如下反应体系:

    融合蛋白 1mg
    TEV Protease 10U

    2、混匀上述体系后于合适温度下孵育。推荐4℃酶切过夜,用户可以根据自己研究的目的蛋白进行摸索。


    3、酶切后可取少量样本进行SDS-PAGE分析,若要去除酶切后体系中的TEV Protease,可用组氨酸标签纯化树脂亲和层析。


TEV Protease切割GST标签蛋白的效果图
含有TEV Protease识别位点的76kD GST标签蛋白与TEV Protease进行反应,底物的用量为3μg,酶的用量依次为0、0.1、0.25、0.5、0.67、1、2U,30℃在1×TEV Buffer中反应1小时后取样进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约50kD的目的蛋白和约26kD的GST标签。