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重组肠激酶

上架时间:2022-06-12
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产品类型:重组蛋白,酶
包装形式:
产品价格:¥5000元
产品详情

重组肠激酶
Recombinant Enterokinase
产品货号: BEK0003
储存温度: -20℃以下
来源:
E.coli
1.产品简介
重组肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。该酶经纯化,纯度高,特异性高,不含其他蛋白酶。肠激酶可以切割含
有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键:天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 -天冬氨酸 - 赖氨酸(DDDDK)。可以在较宽 pH 范
围(4.5-9.5)和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。肠激酶可去除位于蛋白质 N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标
签。
2.应用范围
肠激酶具有高度专一性,水解效率高的特点,它被广泛地应用于基因工程产品的开发,其应用之一是作为工具蛋白酶用于重
组融合蛋白质的特异性断裂,尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。本重组表达产品携带
his 标签,便于切割目标蛋白后除去,保证酶切的可控性和特异性。
本产品为采用重组大肠表达的高纯度、 高活性的重组牛源肠激酶,适用范围广(4-45℃, pH4.5-9.5),并且在各种
去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性重组抗体的质量检测;蛋白质C-末端氨基酸的测定;其它重组多肽类物质的生
产。
3.产品优势
本公司生产的肠激酶,其序列与动物肠激酶相同,可以替代动物源性肠激酶用于各个领域;
酶纯度高,活性高,无外源蛋白和动物源性蛋白污染;
产品以干粉形式存在,便于运输和保存;
每批次可生产公50g以上,保证批间差和批次稳定。
4.产品性能参数
 

肠激酶活性.png

*酶活定义: 1U 定义为在 25℃, 12h-16h 之内, 将 0.5mg 保存于 25mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中的融合蛋白切割 95%所需的酶量。  

5.产品使用建议

5.1 25℃酶切条件:
按照酶活性定义,酶切条件举例:25mM Tris-HCl 8.0 体系中:融合蛋白 0.1-1mg/ml(蛋白总量 50-100µg)重组EK 0.1-0.2U25℃过夜酶切,或完全酶切需 16-24h,用SDS-PAGE检测酶切效果。
5.2 4℃低温酶切条件:4℃能对底物进行有效酶切,但需要将酶切时间延长至 48-64h,或增加 2-3 倍酶量。

5.3 酶切优化和放大
优化:可以对酶切条件进行优化,例如缓冲液pH,融合蛋白浓度,EK的量,以及酶切时间,使融合蛋白能在稳定条件下被酶切,用 SDS-PAGE 检测酶切效果。

5.4 去除重组肠激酶的方法:使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析(例如 sigma T0637)去除重组肠激酶。

5.5  注意:不建议 37℃条件下酶切, 可能会有非特异性酶切出现。

6.储存和运输稳定性

酶液储存稳定性: -20℃, 24 个月稳定; 25℃,一周内,无活性损失。缓冲体系:50mM Tris-HCl,pH8.0,0.25M NaCl,  50%甘油。酶液反复冻融稳定性:反复冻融5次,无活性损失。运输稳定性:蓝冰保温运输,稳定。

7.注意事项

在>200mM 咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切:

7.1 为获得理想酶切结果,请将样品透析到 25mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中, 再进行酶切。

7.2 若不便透析,可将样品稀释,咪唑含量在100mM 以下, NaCl浓度在50mM以下,甘油浓度小于5%以下进行酶切,酶的用量与蛋白的比例不变(即 1U 酶切 500µg 蛋白)。

7.3 如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种,且不便去除,此时适当增加酶量或延长酶切时间,也可达到较好酶切效果。

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