重组蛋白

重组肠激酶
Recombinant Enterokinase
产品货号： BEK0003
储存温度： -20℃以下
来源：E.coli
1.产品简介
重组肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。该酶经纯化，纯度高，特异性高，不含其他蛋白酶。肠激酶可以切割含
有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 -天冬氨酸 - 赖氨酸（DDDDK）。可以在较宽 pH 范
围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。肠激酶可去除位于蛋白质 N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标
签。
2.应用范围
肠激酶具有高度专一性，水解效率高的特点，它被广泛地应用于基因工程产品的开发，其应用之一是作为工具蛋白酶用于重
组融合蛋白质的特异性断裂，尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。本重组表达产品携带
his 标签，便于切割目标蛋白后除去，保证酶切的可控性和特异性。
本产品为采用重组大肠表达的高纯度、 高活性的重组牛源肠激酶，适用范围广（4-45℃， pH4.5-9.5），并且在各种
去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性重组抗体的质量检测；蛋白质C-末端氨基酸的测定；其它重组多肽类物质的生
产。
3.产品优势
 本公司生产的肠激酶，其序列与动物肠激酶相同，可以替代动物源性肠激酶用于各个领域；
 酶纯度高，活性高，无外源蛋白和动物源性蛋白污染；
 产品以干粉形式存在，便于运输和保存；
 每批次可生产公50g以上，保证批间差和批次稳定。
4.产品性能参数 

*酶活定义： 1U 定义为在 25℃， 12h-16h 之内， 将 0.5mg 保存于 25mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中的融合蛋白切割 95%所需的酶量。  

5.产品使用建议

5.1 25℃酶切条件：
按照酶活性定义，酶切条件举例：25mM Tris-HCl 8.0 体系中：融合蛋白 0.1-1mg/ml（蛋白总量 50-100µg）重组EK 0.1-0.2U25℃过夜酶切，或完全酶切需 16-24h，用SDS-PAGE检测酶切效果。
5.2 4℃低温酶切条件：4℃能对底物进行有效酶切，但需要将酶切时间延长至 48-64h，或增加 2-3 倍酶量。

5.3 酶切优化和放大
优化：可以对酶切条件进行优化，例如缓冲液pH，融合蛋白浓度，EK的量，以及酶切时间，使融合蛋白能在稳定条件下被酶切，用 SDS-PAGE 检测酶切效果。

5.4 去除重组肠激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析（例如 sigma T0637）去除重组肠激酶。

5.5  注意：不建议 37℃条件下酶切， 可能会有非特异性酶切出现。

6.储存和运输稳定性

酶液储存稳定性： -20℃， 24 个月稳定； 25℃，一周内，无活性损失。缓冲体系：50mM Tris-HCl，pH8.0，0.25M NaCl，  50%甘油。酶液反复冻融稳定性：反复冻融5次，无活性损失。运输稳定性：蓝冰保温运输，稳定。

7．注意事项

在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切：

7.1 为获得理想酶切结果，请将样品透析到 25mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中， 再进行酶切。

7.2 若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在100mM 以下， NaCl浓度在50mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即 1U 酶切 500µg 蛋白）。

7.3 如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。

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